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HEPES作為IVT反應(yīng)buffer的相關(guān)研究

更新時(shí)間:2023-09-12   點(diǎn)擊次數(shù):1285次

mRNA原液中采用HEPES作為buffer可能與前一步RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。

早在1987年便有研究報(bào)道使用HEPES緩沖對(duì)用于體外轉(zhuǎn)錄,在該研究中考察了不同反應(yīng)條件下IHNV(感染性造血壞死病毒)的 RNA 聚合酶的體外轉(zhuǎn)錄,研究結(jié)果表明對(duì)比Tris,使用HEPES緩沖液可以最大限度地提高體外轉(zhuǎn)錄(IVT)效率。


研究中對(duì)緩沖條件的研究表明,HEPES緩沖液刺激的RNA合成量比Tris緩沖液高三倍(圖1 a),最佳濃度的HEPES緩沖液為400mM。
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2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液,用于進(jìn)一步制備RNA-LPX。

HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer具有優(yōu)勢(shì),這是我們結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),推斷BioNTech采用HEPES緩沖對(duì)作為mRNA原液buffer的原因。

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